Skip to main content

Wyposażenie i metody badawcze ZIiPR

Instytut Rozrodu Zwierząt i Badań Żywności Polskiej Akademii Nauk w Olsztynie > Działalność naukowa > Zespoły > Zespół Immunologii i Patologii Rozrodu > Wyposażenie i metody badawcze ZIiPR

Metody badawcze

  1. Metody in vivo:
    • metody biotechniki rozrodu świń i krów: synchronizacja rui, superowulacja, inseminacja;
    • ultrasonograficzna (USG) diagnostyka narządów rodnych świni, krowy i klaczy;
    • laparotomia świń i krów: kaniulacja naczyń krwionośnych układu rodnego; mikrodializa ciałek żółtych i innych struktur narządu rodnego;
    • przyżyciowe pozyskiwania jajników i ciałek żółtych krów (poprzez laparotomię lub kolpotomię);
    • biopsje błony śluzowej macicy krowy i klaczy.
  2. Metody in vitro:

    Izolacja enzymatyczna i hodowle komórkowe:

    • komórki nabłonka i tkanki łącznej błony śluzowej macicy świni, krowy, klaczy i kotki,
    • komórki steroidogenne ciałka żółtego krowy, klaczy i kotki,
    • komórki warstwy ziarnistej pęcherzyka jajnikowego krowy,
    • komórki śródbłonka naczyń  krwionośnych ciałka żółtego i błony śluzowej macicy krowy, klaczy i kotki,
    • komórki nabłonkowe zatoki mlekonośnej wymienia krowy,
    • hodowla komórek adherentnych i zawiesinowych,
    • transfekcja komórek.

    Inkubacje tkankowe:

    • skrawki błony śluzowej macicy świni, krowy, klaczy i kotki,
    • skrawki ciałka żółtego świni, krowy i klaczy,
    • skrawki zatoki mlekonośnej wymienia krowy.

    Metody wirusologiczne:

    • izolacja, koncentracja i przygotowanie stocków wirusa,
    • test infekcyjności (określanie współczynnika zakażenia – MOI – multiplicity of infection).
  3. Metody analityczne

    3.1  Metody biologii molekularnej:

    • ekspresja czynników pro- i antyapaptotycznych ( TNFα, IFNγ, IL-1α, Il-6, FasL, BCL2, BAX, Caspase3, Caspase8) i ich receptorów,
    • ekspresja enzymów szlaku steroidogenezy (3β-HSD, StAR, CYP450),
    • ekspresja enzymów szlaku metabolizmu kwasu arachidonowego:
      • szlak powstawania leukotrienów (5-LOX) i ich receptorów
      • szlak powstawania prostaglandyn (PTGS-2, PGES, PGFS, 9KPGR, AKR1B5)
    • ekspresja enzymów związanych z syntezą kwasu lizofosfatydowego (PLD i PLA2) i jego receptorów (LPA1, LPA2, LPA3, LPA4),
    • ekspresja oksytocyny i  jej receptora,
    • ekspresja czynnika wzrostu nerwów i jego receptorów (TrkA, p75) na poziomie mRNA metodą RT Real Time PCR i semiquantitative RT PCR oraz białka metodą Western-blot,
    • klonowanie/PCR (np. genów wirusowych),
    • Western blot (np. badanie ekspresji wirusowych białek litycznych i latentnych),
    • Southern blot,
    • electromobility shift assay (EMSA) –np. wiązanie się białka wirusa do sekwencji pochodzących z genomu wirusa.

    3.2  Immunoizotopowe oznaczanie (RIA) stężeń:

    • hormonów białkowych (LH, PRL) i receptorów LH/hCG z użyciem preparatów znakowanych jodem (J-125),
    • hormonów steroidowych (P4, A4, T, E1, E2, kortyzol), prostaglandyn oraz metabolitu PGF2α – PGFM z użyciem hormonów znakowanych trytem (H3) oraz wykonywanie jodowań hormonów białkowych (LH, PRL) i cytokin (IL-1β, IL-6, TNF-α),

    3.3  Immunoenzymatyczne oznaczanie stężeń (ELISA):

    • hormonów białkowych (LH),
    • hormonów steroidowych (P4, T4, E2, kortyzol),
    • prostaglandyn (PGE2, PGF2α) oraz metabolitu PGF2α – PGFM,
    • oksytocyny i endoteliny przy zastosowaniu hormonów znakowanych peroksydazą chrzanową (HRP) lub biotyną,

    3.4  Immunocytochemiczna lokalizacja:

    • enzymów szlaku przemian kwasu arachidonowego w jajniku, macicy oraz komórkach nabłonkowych zatok mlekonośnych (PTGS-2, PGES, PGFS, AKR1B5, 5-LO),
    • cytokin w jajniku i macicy (TNF-α, IL-1α, IL-1β i innych),
    • enzymów szlaku przemian cholesterolu w jajniku (P450scc, 3β-HSD, aromatazy) oraz komórkach nabłonkowych zatok mlekonośnych (11β-HSD, 3β-HSD),
    • receptorów (TNFR I, TNFR II, IL-1αR, IL-1 βR, LTRI, LTRII, GC-R, LPAR-1, LPAR-2, LPAR-3, LPAR-4, LPAR4, OTR, TrkA, p75),
    • neuroprzekaźników i ich markerów (NPY, VIP, SOM, SP, GAL, CGRP, PACAP, DβH, VACHT, nNOS),
    • fluorescence in situ hybridization (FISH) – wykrywanie genomu wirusa w komórce,
    • znakowanie immunofluorescencyjne (IFA) białek wirusowych w komórce, również w połączeniu z rozprowadzaniem metafaz,
    • fluorescence activated cell sorting (FACS) analysis – analiza cyklu komórkowego.

    3.5  Analiza parametrów krytycznych i gazometrii krwi:

    Analiza parametrów gazometrii, elektrolitów i oksymetrii przy zastosowaniu analizatora parametrów krytycznych RAPIDpoint 405 (SIEMENS).

    3.6  Morfometryczna analiza krwi:

    Podstawowe i rozszerzone badania morfologiczne krwi bydła, kozy, owcy, konia, świni, kota, psa, królika, świnki morskiej, szczura oraz myszy, przy zastosowaniu analizatora hematologicznego ADVIA 2120i (SIEMENS).

    3.7  Immunochemiczna–chemiluminescencyjna analiza krwi:

    Oznaczanie hormonów steroidowych (P4, T, E2, kortyzol) oraz markerów stanu zapalnego (Il-1β, TNF-α, IL-10, LBP), przy zastosowaniu analizatora immunochemicznego IMMULITE®1000 (SIEMENS).

    3.8  Metody proteomiczne: 2D, 2D-DIGE i MALDI-TOF/TOF w celu określenia:

    • enzymów szlaku przemian kwasu arachidonowego w jajniku, macicy oraz komórkach nabłonkowych zatok mlekonośnych (PTGS-2, PGES, PGFS, AKR1B5, 5-LO),
    • białek, które mogą być odpowiedzialne za wczesną zamieralność zarodków u świń,
    • enzymów szlaku przemian cholesterolu w jajniku (P450scc, 3β-HSD, aromatazy) oraz komórkach nabłonkowych zatok mlekonośnych (11β-HSD, 3β-HSD),
    • białek związanych z formowaniem, funkcjonowaniem oraz regresją ciałka żółtego.

    3.9  Koimmunoprecypitacja

    • Określenie związków wiążących 17-β-estradiol.

Wykaz aparatury

  1. Dwa stanowiska robocze do izolacji i hodowli komórek:
    • Komora z przepływem laminarnym Thermo Scientific MSC-ADVANTAGE (180)
    • Komory z przepływem laminarnym Thermo Scientific MSC-ADVANTAGE (120) – 2 szt.
    • Komora Esico Class II BSC
    • Inkubator CO2 ThermoForma
    • Inkubator CO2 Sanyo
    • Inkubator Memmert IMCO2-153
    • Wirówka MPW 350R 2 szt.
    • Wirówka MPW 223E
    • Pompa perystaltyczna VederFlex Scientific
    • Mikroskop odwrócony standardowy Olympus CKX41 – 2 szt.
    • Mikroskop Olympus CX31RBSF-2
    • Inkubatory z wytrząsaniem EB TH15(Edmund Bühler) – 2 szt.
    • Łaźnia wodna z wytrząsaniem Julabo SW23
    • Łaźnia wodna Major Science SWB-10L-1
    • Myjka ultradźwiękowa do pipet Sonorex
    • Autoklaw Sanyo – 2 szt.
    • Wirówka Eppendorf 5804R
    • Cieplarka Sanyo MOV-112F
    • Suszarka-sterylizator Binder E28
    • Suszarka-sterylizator Terma
    • Zmywarka Smeg GW1060C
  2. Stanowisko robocze do izolacji kwasów nukleinowych:
    • Komora z przepływem laminarnym Holten (90)
    • Wirówka laboratoryjna Hettich Universal 32R
    • Wirówka laboratoryjna Eppendorf miniSpin
    • Aparat do elektroforezy agarozowej BIO-RAD PowerPac
    • UV Transilluminator WEALTEC
    • Termocykler BIO-RAD MJ Mini
    • Homogenizator ultradźwiękowy UP50H
    • Homogenizator TissueRuptor Qiagen
    • Wirówka lab Waeltec E-Centrifuge
    • Łaźnia wodna z wytrząsaniem Major Science MW-WB
    • Vortex BioRad Sproud
    • Vortex Mixer LabNet
  3. Stanowisko robocze do Western blot:
    • Aparat do elektroforezy poliakryloamidowej BIO-RAD PowerPac
    • Aparat do mokrego transferu BIO-RAD PowerPac
    • Aparat do półsuchego transferu TE70PWR Amersham Biosciences
    • System detekcji białek SNAP i.d. Millipore
    • RollMixer Chemland
  4. Zintegrowana Pracownia Immunodiagnostyki

    Zespół wspólnie z Zespółem Immunologii i Mikrobiologii Żywności zorganizował Zintegrowaną Pracownię Immunodiagnostyki. Ze strony ZIPR w skład Zintegrowanej Pracowni Immunodiagnostyki wchodzi:

    4.1. Stanowisko robocze do immunoenzymatycznej analizy stężeń hormonów (ELISA);

    4.2. Stanowisko robocze do immunoizotopowej analizy stężeń hormonów (RIA);

    4.3. Stanowisko robocze do morfometrycznej analizy krwi;

    4.4. Stanowisko robocze do immunochemicznej analizy krwi;

    4.5. Stanowisko robocze do analizy parametrów krytycznych i gazometrii krwi;

  5. Pracownia Mikrobiologii i Wirusologii Molekularnej

    5.1 Stanowisko robocze do pracy z kulturami in vitro oraz GMM klasy II;

    5.2 Stanowisko robocze do izolacji fibroblastów z tkanek ludzkich;

    5.3 Stanowisko robocze do analizy ekspresji białek (SDS PAGE + Western blot);

    5.4 Stanowisko robocze do hodowli bakterii na podłożach płynnych i stałych oraz kokultur bakterii z tkankami.