Metody in vivo:
- Opracowanie metod kolekcji materiału biologicznego od zwierząt wolno żyjących (nasienie, krew obwodowa, kał, fragmenty tkanek, biopsje)
Metody in vitro:
Izolacja enzymatyczna i hodowle komórkowe:
- komórki nabłonka i tkanki łącznej błony śluzowej macicy.
- komórki steroidogenne ciałka żółtego.
- komórki warstwy ziarnistej pęcherzyka jajnikowego.
- komórki śródbłonka naczyń krwionośnych ciałka żółtego i błony śluzowej macicy.
Inkubacje tkankowe:
- skrawki błony śluzowej macicy.
- skrawki ciałka żółtego.
Metody analityczne
3.1. Metody biologii molekularnej:
- ekspresja czynników pro- i antyapaptotycznych (TNFα, IFNγ, IL-1α, Il-6, FasL, BCL2, BAX, Caspase3, Caspase8) i ich receptorów.
- ekspresja enzymów szlaku steroidogenezy (3β-HSD, StAR, CYP450)
- ekspresja enzymów szlaku metabolizmu kwasu arachidonowego:
- szlak powstawania leukotrienów (5-LOX) i ich receptorów.
- szlak powstawania prostaglandyn (PTGS-2, PGES, PGFS, 9KPGR, AKR1B5).
- ekspresja oksytocyny i jej receptora.
3.2. Immunoizotopowe oznaczanie (RIA) stężeń:
- hormonów białkowych (LH, PRL) i receptorów LH/hCG oraz cytokin (IL-1β, IL-6, TNF-α)
- hormonów steroidowych (P4, A4, T, E1, E2, kortyzol), prostaglandyn oraz metabolitu PGF2α – PGFM.
3.3. Immunoenzymatyczne oznaczanie stężeń (ELISA):
- hormonów białkowych (LH) i peptydowych (oksytocyna, endotelina).
- hormonów steroidowych (P4, T4, E2).
- prostaglandyn (PGE2, PGF2α) oraz metabolitu PGF2α – PGFM
3.4. Immunocytochemiczna lokalizacja w narządach rozrodczych samicy:
- enzymów szlaku przemian kwasu arachidonowego (PTGS-2, PGES, PGFS, AKR1B5, 5-LO).
- cytokin i ich receptorów (np. TNF-α, IL-1α, IL-1β i innych).
- enzymów szlaku przemian cholesterolu (P450scc, 3β-HSD, aromatazy).
3.5. Wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC):
- hormonów steroidowych w materiale biologicznym,
- enzymów szlaku metabolizmu kwasu arachidonowego.
